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求提取毒种RNA方法

发布时间:2019-07-30 15:46 来源:未知 编辑:admin

  实验要求进行毒种基因测序,我购买了TAKARA公司的miniBEST viral DNA/RNA EXtraction kit ver4.0试剂盒提取毒种RNA,毒种滴度在5.0-6.3之间,提取后保存在零下70度三天,后送测序公司,测序公司要求加乙醇后送检,但送到后,对方表示没有得到沉淀RNA。

  因为我们公司局限,送检时没有电泳先检测,所以我也不知道是我没提出来,还是路上降解了,特请教各位达人,有什么好的方法提取毒种RNA。

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  2、加600ul异硫氰酸胍,然后加入对照和样品,再加200ul氯仿,颠倒混匀;

  4、在第3步离心快结束时,另取同样多eppendorf管,加入400ul于-20℃预冷的异丙醇;

  5、取第3步离心的上清(一定不要吸取到中间白色层,第3步离心结束往外拿的时候,管子尽量不要倾斜)转移到第4步准备的管中,颠倒混匀;

  6、13000rpm离心15min,轻轻倒去上清,在吸水纸上尽量沾干液体;

  8、13000rpm离心15min,轻轻倒去上清,在吸水纸上尽量沾干液体;

  9、4000rpm离心10sec,将管壁残存液体甩到底部,用微量枪头吸干,室温干燥2-3min(不可过分干燥,防止下一步RNA不溶解);

  10、加入20ulDEPE水(加入depc的纯水高压后的水即为DEPE水),轻轻混匀溶解RNA。2000rpm离心5sec,冰上保存备用(最好2小时内使用,以免RNA降解)。

  展开全部给你推荐个RNA提取辅助试剂,外源RNA酶清除剂,避免台面,洗头,离心管这样的耗材引入的外源性RNA酶对RNA的降解。华越洋生物

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